Folin——酚试剂的配置_产品知识

溶液1）:1:2g无水碳酸钠溶于100m10.2mol/l氢氧化钠中（以配制成 5X）,
用时稀释5倍。溶液2）:0.5g 五水硫酸铜溶于100ml1％酒石酸钾钠
（或酒石酸钠）溶液。将稀释后的溶液 1 与溶液 2 ，以50:1的比例混合。
混合后即为Folin——酚试剂甲，此试剂只能用一天，过期失效。

二.Folin——酚试剂乙

原溶液度为2moL/L使用前需稀释一倍，用多少稀释多少，使其*后浓度为
1moL/L,此为Folin——酚试剂乙应用液。Folin——酚试剂乙原液平时应封闭
贮存于 4°C冰箱中避光保存。

三.操作方法

标准曲线的制作：取14支试管分成两组，按下表顺序加入试剂，混匀，于室
温放置10分钟。再加入0.5毫升试剂乙，立即摇匀，在室温放置 30 分钟，
然后于500nm 处比色。测定光密度值。取两种测定的平均值，以蛋白质浓度
为横座标，光密度值为纵座标，绘制标准曲线为定量的依据。

试剂/管号	0	1	2	3	4	5	6
BSA/ml（250ug/ml	0	0.1	0.2	0.4	0.6	0.8	1.0
蒸馏水/ml	1.0	0.9	0.8	0.6	0.4	0.2	0
试剂甲/ml	5	5	5	5	5	5	5
试剂乙/ml	0.5	0.5	0.5	0.5	0.5	0.5	0.5

样品测定：
（1）取 1 毫升样品溶液（约含 20-250微克多肽或蛋白质）加入 5 毫升试剂甲
混匀，于温室放置 10 分钟。（2）加入0.5毫升试剂乙（Folin——酚），立即摇匀，
于室温保温 30 分钟：然后500nm处比色，以 1 毫升水代替样品作空白对照。测定后，
可以从标准曲线中查出未知样品浓度。若用 0.5 厘米光程的比色杯进行比色，可按下
面方法进行操作：取0.2 毫升样品溶液（约含 5-100微克多肽或蛋白质），加入 1 毫升
试剂甲（可选用 0.3-0.5 厘米直径的小试管）混匀，10分钟以后，再加入 0.1 毫升试剂乙
，立刻混匀，30 分钟后比色一般来说，若多肽或蛋白质浓度在 2-25 微克，则采用波长
755nm，而 25 微克以上则采用 500nm 比色为宜。

原创作者：北京鼎国昌盛

第15年

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